細(xì)胞培養(yǎng)無小事，需注意的四個事項！

培養(yǎng)細(xì)胞的*培養(yǎng)基一般由基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如MEM）和添加劑（血清或細(xì)胞生長因子）組成，培養(yǎng)基的配方都會隨著細(xì)胞需要的營養(yǎng)不斷的改進(jìn) ，而抗生素也是，廣譜抗生素使用太多，會導(dǎo)致細(xì)胞的耐受性提高，從而產(chǎn)生抗性，甚至有些老師為了實驗的精確性，選擇不用抗生素培養(yǎng)細(xì)胞。

一、基礎(chǔ)培養(yǎng)基

絕大多數(shù)培養(yǎng)基是建立在平衡鹽溶液(BSS)基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)，生物學(xué)最是通用的培養(yǎng)基是Dulbecco`s改良培養(yǎng)基——DMEM，同MEM含有相同的營養(yǎng)成分，但濃度高出2~4倍。細(xì)胞培養(yǎng)選擇某種培養(yǎng)基，應(yīng)仔細(xì)了解成分表，選擇適合細(xì)胞成長的培養(yǎng)基 ，一般來說，懸浮細(xì)胞用1640培養(yǎng)基比較多，而貼壁細(xì)胞用DMEM的較為常見。

在有些培養(yǎng)基中谷氨酸比其他氨基酸有更高的濃度，這是因為它具有不穩(wěn)定性以及在許多細(xì)胞培養(yǎng)中它常用作碳源。MEM與F12均要用5%的CO2來平衡，DMEM含更高濃度的NaCO3，培養(yǎng)敏感的神經(jīng)細(xì)胞時要用10%的CO2來平衡，當(dāng)然也可以在較低CO2濃度下使用。這些基礎(chǔ)培養(yǎng)基的組成成分是建立在對不同細(xì)胞系生長的研究之上的，但通常在原代培養(yǎng)中使用也能有比較令人滿意的結(jié)果。

原則上，HEPES作為緩沖劑可用來代替碳酸氫鹽，以解除需要高濃度CO2培養(yǎng)環(huán)境的限制。實際操作中并非如此簡單。顯然，溶解的CO2與碳酸氫鹽對良好的細(xì)胞生長是重要的。Leiboviz`s L15培養(yǎng)基采用了與眾不同的BSS作基礎(chǔ)，它含有高濃度的氨基酸來提高緩沖能力，培養(yǎng)基中使用半乳糖作碳源，以阻止培養(yǎng)基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代謝產(chǎn)生。所以使用L-15培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞一般都需要密封培養(yǎng)瓶，或者使用100%的空氣培養(yǎng)。

二、血清

細(xì)胞在單純的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中不能存活，在特殊類型的細(xì)胞培養(yǎng)中必須提供某些有營養(yǎng)物質(zhì)及生長因子才能使細(xì)胞得以生長并維持生長狀態(tài)?；A(chǔ)培養(yǎng)基常常要添加血清，血清終濃度多為5~20%。特殊用途的血清來源須用經(jīng)驗確定，廣泛應(yīng)用的血清種類有馬血清與胎牛血清。胎牛血清中富含有絲分裂因子，常選其作增殖細(xì)胞用的血清，也用于細(xì)胞系和原代培養(yǎng)。而馬血清常常用來作有絲分裂后的神經(jīng)元培養(yǎng)。

血清的不同批號含有不同的成分，應(yīng)該在使用前對血清進(jìn)行測試。大多數(shù)試劑商提供樣品，所滿意的批號即可選用，這樣可以一次得到足夠一年用量的血清，

三、抗生素

在細(xì)胞培養(yǎng)中較為常用的抗生素是青霉素（常用濃度是25~100ui/ml）與鏈霉素（25~100μg/ml）。這兩種抗生素?；旌鲜褂谩Ｔ谝恍嶒炇依?，它們常規(guī)加入所有的培養(yǎng)基中。慶大霉素（10~100μg/ml）通常有廣譜抗菌效應(yīng)，并具有溶液穩(wěn)定性，一般實驗室經(jīng)常使用。

四、培養(yǎng)的保持

培養(yǎng)物是應(yīng)該保持在孵箱中的。孵箱可以自動將O2與CO2混合很快達(dá)到培養(yǎng)基的設(shè)計要求，空氣中的氧濃度比血液和腦脊液中要高得多，高濕度可避免培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的蒸發(fā)，保持孵箱中的濕度通常是在箱底部放上一大盆水，這水應(yīng)該經(jīng)常換，乘水容器應(yīng)經(jīng)常消毒以防霉菌生長。若孵箱曾被霉菌孢子嚴(yán)重污染過，那么要想*去除污染則會非常困難。當(dāng)培養(yǎng)物必須要長期保持在孵箱中時，應(yīng)采用較少培養(yǎng)基的瓶、皿，且將蓋子蓋緊以避免蒸發(fā)，或采用相應(yīng)的按比例供空氣的孵箱。

溫度的精確調(diào)節(jié)應(yīng)定期檢查，孵箱溫度常設(shè)置為37℃或較低溫度。細(xì)胞在低溫時可有較長時間的忍耐限度，但當(dāng)溫度升至39℃時，幾小時內(nèi)即死亡。