科研實(shí)驗(yàn)無小事——細(xì)胞的STR鑒定

做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候才發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的種類太多，于是我們需要查詢各種文獻(xiàn)看每個(gè)細(xì)胞的特征，從而設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)規(guī)劃與步驟，我們在緊湊的實(shí)驗(yàn)種完成了實(shí)驗(yàn)，提交文章的時(shí)候，才發(fā)現(xiàn)，需要細(xì)胞鑒定。

據(jù)統(tǒng)計(jì)約30%細(xì)胞系被交叉污染或錯(cuò)誤辨識,因使用了交叉污染或錯(cuò)誤辨識的細(xì)胞而導(dǎo)致研究結(jié)論錯(cuò)誤、結(jié)果不可重復(fù)、臨床細(xì)胞治療災(zāi)難性后果……這浪費(fèi)大量時(shí)間、精力和金錢。因此NIH、ATCC等機(jī)構(gòu)多次發(fā)出呼吁，要求研究者對細(xì)胞進(jìn)行鑒定，最近美媒報(bào)道1/6科學(xué)家在研究使用“假"細(xì)胞，2014年12月、2015年2月Science雜志分別發(fā)表文章專題闡述細(xì)胞交叉污染和錯(cuò)誤辨識的嚴(yán)重性；2015年4月Nature通知：Nature旗下所有雜志將要求作者鑒定論文中所用細(xì)胞系；2015年6月即有報(bào)道稱一科學(xué)家因用錯(cuò)細(xì)胞系，撤銷Nature論文。NIH、ATCC、Nature和Science等機(jī)構(gòu)對此多次發(fā)出呼吁,要求研究者對細(xì)胞進(jìn)行鑒定，STR基因分型已被作為金標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用于細(xì)胞系鑒定,越來越多雜志開始要求投稿人提供細(xì)胞STR鑒定結(jié)果。

在2011年美國就已經(jīng)頒布了細(xì)胞STR鑒定國家標(biāo)準(zhǔn)（ANSI/ATCC ASN-0002-2011）。目前STR檢測已被廣泛應(yīng)用于親子鑒定、個(gè)體識別、細(xì)胞來源判定等方面。ATCC、DSMZ、JCRB等國際有名細(xì)胞庫已將STR基因分型列為細(xì)胞鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)。

STR鑒定已經(jīng)成為了細(xì)胞株的“ID"能在科研界通行無阻，必須要有STR。那么動(dòng)物源呢，因?yàn)榻⒌腄NA條帶并不完善，目前只有小鼠的部分細(xì)胞可以提供STR。

STR鑒定描述：

利用熒光標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物長度多態(tài)分析方法對細(xì)胞樣本進(jìn)行9個(gè)/16個(gè)STR位點(diǎn)進(jìn)行分型。設(shè)計(jì)PCR引物，組成2個(gè)PANEL用于擴(kuò)增多態(tài)位點(diǎn)。位點(diǎn)的熒光標(biāo)記采用引物上標(biāo)記5’FAM熒光標(biāo)記。引物用在線Primer3 軟件設(shè)計(jì)。PCR產(chǎn)物稀釋后取少量與內(nèi)標(biāo)標(biāo)記混勻后直接上ABI 3130xl進(jìn)行毛細(xì)管電泳，數(shù)據(jù)文件用GeneMapper4.0（Appliedbiosystems）來分析。

STR（Short Tandem Repeat，短串聯(lián)重復(fù)序列）是一類廣泛存在于真核生物基因組中的DNA串聯(lián)重復(fù)序列，由于其核心序列重復(fù)次數(shù)存在個(gè)體差異多態(tài)性，因此STR也被稱為細(xì)胞的DNA指紋。