細胞培養(yǎng)常遇問題集錦（六）

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▲問：有時候細胞和細胞之間就會出現(xiàn)這種小黑點，高倍鏡下看少數(shù)在原地打轉(zhuǎn)，但是培養(yǎng)液不渾濁。那其中不會動的是細菌嗎？

答：原地打轉(zhuǎn)的可能為黑膠蟲，會動的是細菌，細菌有鞭毛。黑膠蟲是一種現(xiàn)象，身份可能是細菌，有鞭毛會游動。

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問：想問一下，已經(jīng)使用三抗以及抗支原體的藥物培養(yǎng)細胞一周，但還是有少量黑膠蟲，但細胞生長狀態(tài)還好，這樣的話接下來還需要處理嘛？好像有一種有少量黑膠蟲但不影響細胞狀態(tài)可以不做處理的說法？

答：一周，黑膠蟲數(shù)量減少，已經(jīng)見效了，但還是要繼續(xù)處理，因為黑膠蟲和細胞有此消彼長的特點，細胞復(fù)蘇或剛傳代時，因為此時細胞狀態(tài)差，所以特別容易爆發(fā)黑膠蟲，黑膠蟲數(shù)量增多，當細胞復(fù)蘇率增強時，黑膠蟲數(shù)量會減少。

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問：話說養(yǎng)細胞的時候，一直加雙抗，會對哪些實驗有影響呢？之前聽說做干擾的時候，要撤雙抗。

答：一般做功能學(xué)實驗，藥理學(xué)，毒理學(xué)，信號通路都要撤掉雙抗。

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問：Cho傳代接種密度0.4 e5，4天才長到11e5，是怎么回事？DT從16.5變成20了。一直都用的一樣的培養(yǎng)基，是不是凍溶會影響？是cho細胞，搖瓶培養(yǎng)。

答：檢查一下營養(yǎng)體系是不是不適合，如不是，那就考慮是胰酶消化這一步是不是有問題。你這邊是把cho貼壁馴化成懸浮了。

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問：請問怎么培養(yǎng)破骨細胞？怎么提取到培養(yǎng)的protocol？遇到一個情況，怎么消化也消化不下來，想從源頭找一找，是什么原因？

答：破骨細胞的培養(yǎng)方法主要有：骨髓機械分離法，骨髓細胞誘導(dǎo)法，脾干細胞誘導(dǎo)法，血液單核細胞誘導(dǎo)法，小鼠RAW264.7細胞系誘導(dǎo)法及骨巨細胞瘤分離法。

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