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    如何養(yǎng)好SH-SY5Y細(xì)胞?

    發(fā)布時(shí)間: 2021-12-03  點(diǎn)擊次數(shù): 1624次

    SH-SY5Y細(xì)胞于1970年構(gòu)建,是骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)3次克隆后得到的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。


    如今,SH-SY5Y細(xì)胞已經(jīng)是科學(xué)研究中較為常用的細(xì)胞系之一了。


    但很多人在養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞的過(guò)程中,總會(huì)遇到各種問題。今天,小編來(lái)為大家一一解答。


    SH-SY5Y細(xì)胞基本信息


    細(xì)胞名稱

    SH-SY5Y  (人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)

    細(xì)胞別稱

    SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y;

    SK-SH-SY5Y; SY5Y

    種屬及來(lái)源

    人(女性,4歲)

    腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤,轉(zhuǎn)移部位骨髓

    生長(zhǎng)特性

    半貼半懸

    生長(zhǎng)形態(tài)

    上皮細(xì)胞樣

    生長(zhǎng)培養(yǎng)基

    MEM/F12+15% FBS+1% P/S

    培養(yǎng)環(huán)境

    氣相:95%空氣,5%CO2   溫度:37℃

    推薦傳代比例

    1:3-1:4

    推薦換液頻率

    48小時(shí)/次

    凍存液配方

    55% MEM/F12+40% FBS+5% DMSO


    SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及解決方案


    01

    收貨篇


    常溫運(yùn)輸過(guò)程中,細(xì)胞不免受到震蕩和溫度變化的影響,出現(xiàn)皺縮、聚團(tuán)甚至脫落的現(xiàn)象。

    遇到這種情況,不用緊張,只要正確處理,細(xì)胞就能恢復(fù)正常生長(zhǎng)。


    收貨時(shí)皺縮

    常溫細(xì)胞收貨后,把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)即可。


    如果4小時(shí)后細(xì)胞仍然沒有鋪展開,密度適中的前提下可以放培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜(過(guò)夜前倒出部分培養(yǎng)基,留5-10mL在瓶中,瓶蓋擰松


    收貨時(shí)聚團(tuán)

    常溫細(xì)胞收貨后,先把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài),再進(jìn)行傳代。


    傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。


    收貨時(shí)脫落

    常溫細(xì)胞收貨后,先把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài)再處理。


    脫落后的細(xì)胞通常聚團(tuán)漂浮,通過(guò)離心將漂浮的細(xì)胞團(tuán)收集起來(lái),在離心管里進(jìn)行胰酶消化后重新鋪板即可。


    貼壁細(xì)胞常規(guī)方法消化下來(lái),和處理好的脫落細(xì)胞合并,混勻后鋪板。


    收貨脫落處理步驟

    ① 1200rpm(約250g)3min離心收集細(xì)胞,去除舊培養(yǎng)基;

    ② PBS 重懸細(xì)胞,再次 1200rpm(約250g)3min離心,去除PBS;

    ③ 加入 1mL 左右 0.25%胰酶重懸細(xì)胞,吹打1-2下吹起沉淀即可; 

    ④ 放入培養(yǎng)箱約 1-3min;

    ⑤ 用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞團(tuán)分散;

    ⑥ 迅速加入 3-5mL 含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化;

    ⑦ 1200rpm(約250g)3min離心,去除胰酶;

    ⑧ 加入新鮮培養(yǎng)基按合適比例接入無(wú)菌培養(yǎng)器皿中。


    圖片

    ▲ 收貨時(shí)皺縮、脫落

    圖片

    ▲ 處理后第三天


    02

    培養(yǎng)篇


    SH-SY5Y細(xì)胞生長(zhǎng)較緩慢。在培養(yǎng)過(guò)程中,有以下幾點(diǎn)需要注意。


    能否使用DMEM/F12

    MEM/F12和DMEM/F12都可以培養(yǎng)SH-SY5Y,并且都有相應(yīng)的文獻(xiàn)支持。但這兩種培養(yǎng)基培養(yǎng)出來(lái)的形態(tài)會(huì)有細(xì)微差異。


    另外,使用品質(zhì)好的胎牛血清將極大改善細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)


    培養(yǎng)基容易變黃

    因其神經(jīng)母細(xì)胞瘤的特性,SH-SY5Y細(xì)胞成簇生長(zhǎng),飽和密度大。


    有時(shí)顯微鏡下看著密度不高,但細(xì)胞簇實(shí)際密度大,所以培養(yǎng)基很快就變黃了。這時(shí)候,需及時(shí)換液。


    生長(zhǎng)異常緩慢

    當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)一周都無(wú)法傳代時(shí),可以將細(xì)胞消化下來(lái),接種到更小的容器中,人為增加細(xì)胞密度,從而促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。


    平時(shí)傳代時(shí)也要注意接種密度不能太低。


    傳代注意事項(xiàng)

    不建議連續(xù)消化細(xì)胞,連續(xù)消化細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差。


    傳代時(shí)消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),通常1-3min即可,若細(xì)胞解離太快可適當(dāng)用PBS稀釋胰酶。


    吹打細(xì)胞時(shí),動(dòng)作輕緩一些,減少對(duì)細(xì)胞的物理刺激。


    圖片

    ▲ SH-SY5Y正常生長(zhǎng)照片


    03

    形態(tài)篇


    SH-SY5Y細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞同時(shí)存在,貼壁細(xì)胞呈上皮樣,有短觸角延伸出來(lái),傾向于成簇生長(zhǎng),容易成團(tuán)。


    懸浮細(xì)胞過(guò)多

    有文獻(xiàn)報(bào)道,SH-SY5Y在懸浮狀態(tài)也能維持生長(zhǎng)。


    SH-SY5Y生長(zhǎng)時(shí),大部分為貼壁細(xì)胞,少量為懸浮細(xì)胞。 如果SH-SY5Y出現(xiàn)大量懸浮的細(xì)胞,就需要引起注意了。


    處理辦法

    換液時(shí)將懸浮細(xì)胞離心收集,新鮮培養(yǎng)基重懸后接種回原瓶/原皿。

    當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好、密度適中時(shí),可以舍棄懸浮細(xì)胞。


    成團(tuán)嚴(yán)重

    另外,SH-SY5Y細(xì)胞非常敏感,在受到溫度、化學(xué)或物理刺激后容易出現(xiàn)成團(tuán)現(xiàn)象。


    一個(gè)視野下,有少量成團(tuán)現(xiàn)象,無(wú)需特殊處理。成團(tuán)嚴(yán)重,幾乎沒有鋪展開的細(xì)胞并且培養(yǎng)數(shù)天未展開時(shí),就需要按以下方法特殊處理一下了。


    圖片

    ▲ 成團(tuán)較嚴(yán)重的SH-SY5Y細(xì)胞


    處理辦法

    方法一: 低密度接種,用胰蛋白酶消化細(xì)胞(不超過(guò)5min),按1:6比例傳代接種,并換新的培養(yǎng)器皿。延長(zhǎng)換液時(shí)間,3天換液一次,防止細(xì)胞脫落。

    方法二: 使用多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)器皿,以加快細(xì)胞貼壁速度,降低細(xì)胞聚集成團(tuán)的幾率。

    方法三 重新鋪板,并更換新配制的培養(yǎng)基,并加大血清比例(不超過(guò)20%)。

    方法四:接種時(shí),減少培養(yǎng)基量(如T25加3mL)以加快細(xì)胞貼壁速度,等待細(xì)胞貼壁后(約8-12小時(shí)),再補(bǔ)加培養(yǎng)基。


    預(yù)防成團(tuán)的方法

    控制細(xì)胞密度不超過(guò)80%,當(dāng)密度到達(dá)或超過(guò)80%及時(shí)傳代;傳代時(shí)切勿暴力吹打,避免對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械刺激。

    使用質(zhì)量好的培養(yǎng)基和胎牛血清,減少內(nèi)毒素等有害物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的刺激。

    請(qǐng)勿頻繁把細(xì)胞從培養(yǎng)箱拿出,氣溫低時(shí)需開暖氣維持細(xì)胞房溫度;使用PBS、培養(yǎng)基前37度預(yù)熱,以避免溫差對(duì)細(xì)胞造成刺激。


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