細胞培養(yǎng)的注意事項

取出冷凍管后，須立即放入37 C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。

除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分貼壁細胞株，在解凍之后，應直接放入含有12-16ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，懸浮細胞可先離心去掉DMSO，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。

不能。每一個細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活或者老化空泡現(xiàn)象，如一定要替換，建議馴化，按照血清的馴化方式操作即可。

需要按比例馴化，新舊血清比為：3：2，1：2，1：3直到*更替。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時，細胞培養(yǎng)時應使用10% CO2；當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5 g時，則應使用5% CO2培養(yǎng)細胞。

視細胞生長密度而定，整體50%以下2-3天更換一次培養(yǎng)基，整體密度50%以上一天更換一次或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。

一般使用之trypsin-EDTA濃度為0.05% trypsin-0.53m MEDTA.4 Na。第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于–20 C，避免反復冷凍解凍造成trypsin之活性降低，并可減少污染之機會。

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高，直到無法容納為止。分瓶時取出一部分含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶，加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度，重復前述步驟即可。

依照細胞株基本數(shù)據(jù)和細胞的生長情況傳代，若第一次接種不了解細胞的基本特征，建議1：2傳代，后續(xù)觀察細胞特點，若1-2天即可達到密度80%以上建議1：3或以上。傳代的時候請注意：細胞數(shù)太少或稀釋得太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。

欲回收動物細胞，其離心速率一般為300xg (約1,000rpm)，5 - 10分鐘，過高之轉速，將造成細胞死亡。