砷鉬酸比色法

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：

在一系列刻度試管中，分別加入200μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5及0.6 mL，再順序加入蒸餾水2、1.9、1.8、1.7、1.6、1.5 及1.4 mL，配成濃度分別為0、10、20、30、40、50 及60μg/mL 的系列葡萄糖溶液。每試管加入銅試劑2mL，混勻后沸水浴中加熱10min，立即冷卻，再加入2mL 砷鉬酸試劑，振蕩兩分鐘后稀釋到20mL,用分光光度計(jì)在620nm 波長下比色，測(cè)其光密度OD620nm（做一式兩份）。以糖濃度微克數(shù)為橫坐標(biāo)，光密度OD620nm 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.植物樣品中還原糖的提取：

將樣品洗凈，吸干其表面水分，切碎混勻，稱取1g 放入研缽中，加入約0.5g 石英砂，磨成勻漿，加水將樣品由玻璃漏斗沖入100mL 容量瓶中，加水達(dá)70-80mL，搖勻后置于80℃恒溫水浴上浸提0.5h。

待上述樣品冷卻后，沉淀蛋白質(zhì)，加入5%硫酸鋅5mL，再慢慢滴入0.3mol/L Ba(OH)2 5mL，以沉淀蛋白質(zhì)。振蕩后靜置，至上層出現(xiàn)清液后再加一滴Ba(OH)2,直至無白色沉淀時(shí)，向容量瓶加水至刻度。

3.還原糖含量的測(cè)定：

過濾上述已定容的樣品液，取5mL 濾液，再定容到100mL（此步視樣品的含糖量而定）。取已稀釋的溶液2mL，與標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖顯色法相同：加銅試劑2mL，煮沸10min，加砷鉬酸試劑2mL，振蕩2mL，定容到15ml，620nm 波長下比色，記下光密度OD620nm（至少重復(fù)兩次）。