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    B 淋巴細胞膜表面免疫球蛋白的檢查

    發(fā)布時間： 2023-04-12　　點擊次數(shù)： 896次

    原理

    SmIg 是B 細胞的抗原識別受體，也是B 細胞特異的表面標志，用直接免疫熒光法可檢查出SmIg。用熒光素標記的抗Ig 抗體，在一定條件下與淋巴細胞混合，熒光素標記的抗Ig 抗體可以與B 細胞表面的Ig 結合，在熒光顯微鏡下觀察可見B 細胞膜上出現(xiàn)熒光。此方法可用來鑒定B 淋巴細胞。

    材料與儀器

    ICR 小鼠
    異硫氰酸熒光素（FITC）標記的兔抗小鼠Ig 抗體 Hank's液
    臺式離心機 離心管 吸管 移液管

    步驟

    1. 采用頸椎脫臼法處死小鼠，解剖取出脾臟放入盛有6 ml Hank's液的平皿中，用100 目鋼網(wǎng)研磨，混勻。從中吸取1 ml細胞懸液放入一試管中，加滿Hank's液，離心1000 rpm，10 分鐘，洗滌細胞一遍。傾去上清，沉積的細胞恢復1 ml容積，即為約1x107/ml的細胞懸液。另取一支試管，吸取1x107/ml的細胞懸液0.4 ml加Hank's液3.6 ml，即為1x106/ml的細胞懸液。
    2. 取2 ml離心管兩只，各加入1x106 /ml的細胞懸液1 ml，用臺式離心機離心2000 rpm，3 分鐘，棄去上清液。一支加入熒光素標記的兔抗鼠Ig抗體100 ul，另一支不加抗體作對照，置4 ℃冰箱30 分鐘。
    3. 取出離心管，用Hank's 液洗滌細胞兩次，以去除游離的抗體，最后一次離心后棄去上清液，留少許回流液，混勻，滴片，用熒光顯微鏡觀察。

    注意事項

    一、在滴片前要去除游離的抗體，以避免假陽性結果。



    常見問題

    實驗結果
    熒光顯微鏡觀察，落射激發(fā)光下SmIg 陽性細胞可見環(huán)狀或斑點狀熒光。用鎢絲燈光源透射光照明計數(shù)同一視野內淋巴細胞總數(shù)，共計數(shù)200～300 個淋巴細胞，算出其中SmIg 陽性細胞的百分數(shù)。


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