細胞計數(shù)的實驗步驟＆問題分析

細胞計數(shù)在細胞實驗中是非常常見的，大多數(shù)實驗室目前使用細胞計數(shù)板進行細胞計數(shù)，細胞計數(shù)板的結構如下圖所示：

實驗步驟

1.所用細胞密度達到一定要求后進行細胞計數(shù)鋪板，提前準備好細胞計數(shù)板、蓋玻片、計數(shù)器；

2.棄掉原有培養(yǎng)基，加入1ml溫浴的PBS緩沖液清洗；

3.棄掉PBS緩沖液，加入胰酶消化細胞，消化時間根據(jù)細胞類型及日常經(jīng)驗決定；

4.消化相應時間后，加入二倍體積的培養(yǎng)基終止消化，用移液器將細胞全部吹下，轉移至離心管內；

5.離心機室溫800rpm,離心5min；

6.準備和所計數(shù)細胞種類相同的1.5ml Ep管，各加入PBS緩沖液980ul備用；

7.準備細胞計數(shù)板，并在計數(shù)區(qū)蓋上蓋玻片；

8.將5中離心結束的細胞棄上清，加入1ml培養(yǎng)基，充分混懸后取20ul加入到6中的Ep管中，充分顛倒混勻后取12ul加入牛鮑計數(shù)板一側的計數(shù)區(qū)內，保證計數(shù)區(qū)充盈。

9.低倍顯微鏡（物鏡4）下找到計數(shù)視野，上圖中“"B C D E“"區(qū)為細胞計數(shù)區(qū)。

10.高倍鏡（物鏡10）下計數(shù)細胞，依次計數(shù)4個方格內的細胞數(shù)量。

11.計算細胞數(shù)量，假設4個方格內細胞總數(shù)為A,則每ml的細胞數(shù)量為：A/4×104×50（稀釋倍數(shù)）=B個。

12.假設鋪板所需細胞密度為1×104個/ml，則所需8中的細胞混懸液的量為：1×104×C（培養(yǎng)基所需毫升數(shù)，如6孔板每孔加培養(yǎng)基2ml）/B=D ml，最后換算成μl即可。

13.鋪板：取C ml培養(yǎng)基，加入8中細胞混懸液D μl，充分混勻后依次加入培養(yǎng)皿中，放入細胞培養(yǎng)箱內即可。

4.細胞混懸液加入細胞計數(shù)板時，建議使用10μl小槍頭、2-20μl移液器，槍頭傾斜抵住蓋玻片邊緣，緩慢加入，務必保證細胞混懸液全部加入，計數(shù)區(qū)充盈。

關于細胞計數(shù)，以如下實例來充分理解上述計算過程：

4.鋪板：培養(yǎng)基5孔（為防止不夠所以多準備1孔）2ml×5孔=10ml加入細胞混懸液800μl，混勻加入六孔板即可。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術與產品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)?？偛吭O在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩(wěn)定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產品和物流服務。 專業(yè)的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產品供應商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術支持，隨時為客戶提供服務。