貼壁細胞和懸浮細胞如何傳代？

1.貼壁細胞如何進行傳代？

去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;棄PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細胞，顯微鏡下觀察，待細胞變圓，細胞間隙明顯，部分細胞剛開始脫離瓶壁，加4 ml左右（血清）細胞培養(yǎng)液混勻終止消化，將細胞小心吹打下來，1000 rpm/min室溫離心5min;棄上清，細胞沉淀用（血清）細胞培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8)，每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。

2.懸浮性細胞應(yīng)如何傳代處理？

一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中，稀釋細胞濃度即可，若培養(yǎng)液太多時，將細胞懸液移入離心管中，1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清，細胞沉淀用（血清）細胞培養(yǎng)液重懸，按要求分瓶(視細胞密度而定1:4-1:8)，每T25瓶加培養(yǎng)液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細胞趨于成團生長，此時細胞生長狀態(tài)良好，當(dāng)補液時，需避免反復(fù)吹打。